Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中都逐渐扩展

从第一次用到口内自身病原质到用到1改型冠心病诊断腹泻的成果率在儿童时期就有较好的描述，多个口内自身病原质HIV的儿童里有70%在肝脏转换后10年内患病冠心病，而随访15年的儿童这一数量提高到84%。来得之下，占诊断1改型冠心病一半以上的改型1改型冠心病的复发机制还未得不到充分的深入研究。

越来越多的人开始采用已未确定系统来度量1改型冠心病的成果：幼质在用到多种口内自身病原质时踏入第1先决条件，用到血糖间歇性时踏入第2先决条件，用到腹泻时踏入第3先决条件。一些多发口内自身病原质HIV的幼质，在1期和2期，成果快速，并的发展为复发的1改型冠心病。我们之前描述了一四组在首次检测到多种口内自身病原质比对后至少10年无冠心病的却是慢成果者，这四组病患人数少，但形态非常明确。随后，我们断定口内自身肝细胞选择性CD8+T巨噬细胞重排在成果较快的病患里基本不依赖于，但在最近复发和或多或少的冠心病病患里很容易检测到。这确实得出结论，与成果病患来得，这些病患致病系统的调节增强。

晚期深入研究得出结论，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但冠心病病患依赖于一些功能缺陷，其里之外对IL-2的重排能够降低。此外，冠心病病患里的物理现象CD4+T巨噬细胞确实对调节不具抵抗性，表现为物理现象T巨噬细胞的依赖性逼近，自然产生的Treg和质外产生的可借Treg，以及肝细胞历程的CD4+T巨噬细胞里IL-2重排逼近。本深入研究的用意是描述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群却是较快成果者里的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

方式：BOX深入研究是一项以这群人为基础的纵向深入研究，在21岁以下确诊的病患亲属里检查1改型冠心病的脆弱环境因素。我们之前描述了长年较快成果者的形态，他们保持稳定多重口内自身病原质HIV超过10年，但未用到冠心病的诊断腹泻，慢性或非透过性致病。随后，10名继续保持稳定无冠心病并愿意提供大量体液比对的较快成果者纳入T和B巨噬细胞功能数据分析。在现先决条件的深入研究里，8名慢成果者(SP四组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的口内自身病原质HIV。所有的参与者都正处于1改型冠心病成果的1期，尽管一些人随后失去了口内自身病原质对某些肝细胞的HIV重排，然而，一名病患仍未正处于2期至少6年，但未用到诊断腹泻，一名病患被诊断为冠心病，该人会72岁，在采集实验比对时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NADP透过了之外评估。裂解外周血单个氢巨噬细胞(PBMCs)，转用多参数流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞依赖性试验评估NADP里Treg的频谱、表改型和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、也就是说和复归)透过无监督聚类数据分析，评估Treg表改型。

结果：与保健NADP来得，来自慢成果质的知觉CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，作用于的知觉CD4+ Treg频谱提高，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白质(GITR)表示提高有关。一名HbA1c升温的病患与成果较快者和转换的对照四组来得，Treg谱有所不同。功能数据分析得出结论，与保健NADP来得，来自较快成果质的Treg巨噬细胞内的CD4+物理现象T巨噬细胞依赖性相对来说损伤。表现为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表示的依赖性提高。

所示1 深入的表改型数据分析推断，CD4+Treg冠状病毒在慢成果缓冲区里提高。由FlowSOM填充的Treg楼内，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物表示鉴定出10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个端口均是由一个战略性(100个战略性)，越来越大的元战略性(10个元战略性)在端口四组周围剪裁。每个端口里的面包所示回应单个标识的表示行政级别。(b)每个元聚类的热所示，以推断整质标识表示。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)填充所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起同位素为每个metacluster木箱里央线所示(同位素> 0.05%)未确定为HD和SP四组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。绿色带子均是由这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的预测模改型断定，Treg频谱的提高是成果较快的标志。分级门控(a - f)和柑橘数据分析(g-k)较为SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR表示透过裂解，模拟器FlowSOM群质。(b) HD(外缘)和SP(杂色)四组以及NADPSP 606(绿色)里CD25+ cd127的频谱统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱里央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)龙眼簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度后处理，箭头突出的簇被识别为SP和HD缓冲区彼此之间的不同。(j)木箱里央线所示推断了在SP(杂色)和HD(灰点)四组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起同位素(数量)。(k)直方所示推断每个簇的表改型(粉红色)和Treg标识比起表示与背景表示(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里标识的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

所示3 与保健献血者来得，成果较快者知觉treg的GITR提高。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表示标识的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的表示热所示(sp606不之外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(紫色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表示串联，推断直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(绿色)所有NADP之外，p< 0.05(黄色)NADPSP 606和转换的HD不之外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表示，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)串联，推断直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

所示4 来自较快成果的CD4+ treg巨噬细胞操控物理现象CD4+T巨噬细胞的能够降低。SP四组用黄色的里央线和带子回应，HD四组用黑色的里央线和带子回应，绿色的里央线/带子回应NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，指导3同月透过流式巨噬细胞忍术检测。(a-d)与CD4+这样的话者比起应的treg指导(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者指导。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。采用HIV对照(作用于的响应巨噬细胞内含treg)计算依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

所示5 物理现象CD4+T巨噬细胞对较快成果的T巨噬细胞还原的依赖性越来越敏感。SP四组用黄色的里央线和带子回应，HD四组用黑色的里央线和带子回应，绿色的里央线/带子回应NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按观察的数量滴定。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，指导3同月透过流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬细胞因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同指导。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE依赖性百分比(b)。(c,d) CD25依赖性百分比(c)和CD134依赖性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导里的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

推论：我们得出的推论是，来自较快成果子的还原知觉CD4+Treg在GITR表示里得不到了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1改型冠心病风险幼质里的异质性的必要。

文中出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28